决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L. 或小决明Cassia tora L. 的干燥成熟种子，功效清热明目、润肠通便。药理研究表明决明子具有显著的降血压、调血脂、保肝、抗氧化、抑菌等活性。决明子是原卫生部公布的药食两用中药，被广泛应用于保健食品中，截止2018年上半年，在国家食品药品监督管理局公布的国产保健品目录中含决明子保健品198种；同时由于决明子中含有大量蒽醌类成分，其安全性引人关注。《中国药典》2015年版一部仅以蒽醌类成分大黄酚和橙黄决明素量对其实现质量控制，并未对决明子中其他蒽醌类成分进行测定。多指标质控模式符合中药化学成分复杂的特点，能够更好地控制药材质量，但其需要对照品的种类和数量均比较大，难以推广。王智民等提出了一测多评法（QMSA）的多指标质控模式，即在多指标质量控制时，以样品中对照品廉价易得的典型成分为内标，建立该成分与其他成分间的相对校正因子（fk/s），再通过fk/s计算出其他成分的量。已有成功应用QMSA实现对陈皮、大黄、黄柏、牡丹皮、五味子、丹参、预知子等中药的质量控制标准的报道，其中黄连药材的QMSA法被《中国药典》2015年版收载。为了对决明子进行多指标质量进行控制，本方法采用高效液相色谱仪HPLC法建立了4种蒽醌类成分QMSA测定分析方法。
1.1 仪器
润扬LC-3000U高效液相色谱仪2台，RY-20A自动进样器，UV-3000U检测器，柱温箱，LC 色谱工作站软件；FA2004B电子分析天平（上海佑科）；旋转蒸发仪RE-2000B（上海亚荣生化仪器厂）；UPTA-10系列超纯水机（润扬仪器有限公司）。
1.2 试药与试剂
大黄素甲醚（批号110758-201013），大黄素（批号110756-200110），大黄酚（批号110796-201017）均购自中国食品药品检定研究院，橙黄决明素（批号 must-15042315）购自四川省曼斯特生物科技有限公司，上述对照品经HPLC峰面积归一化法检测质量分数均在98%以上。乙腈为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
1.3 药材
6批决明子药材于2015年于成都荷花池专业中药材市场、成都中医药大学附属医院及同仁堂采购。经成都中医药大学卢先明教授鉴定均为豆科植物决明Cassia obtusifolia L. 或小决明Cassia tora L. 的干燥成熟种子，其中除成都同仁堂采购的为炒决明子，其他均为净决明子，样品信息见表 1。
 | 表 1 样品信息Table 1 Sample information |
2 方法与结果
2.1.1 色谱条件
色谱柱为Wondasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以0.1%磷酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱：0～10 min，30%～50% B；10～30 min，50% B；30～65 min，50%～85% B；65～70 min，85%～15% B；70～80 min，15% B。体积流量0.8 mL/min，检测波长285 nm，柱温30 ℃。
2.1.2 混合对照品溶液制备
分别取橙黄决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚适量，精密称定，加无水乙醇-醋酸乙酯（2∶1）混合溶液分别制成含橙黄决明素1.64 mg/mL、大黄素0.400 mg/mL、大黄酚1.29 mg/mL、大黄素甲醚1.26 mg/mL的溶液，作为各对照品储备液。分别精密移取上述各储备液各1 mL转移至50 mL量瓶中，加无水乙醇-醋酸乙酯（2∶1）混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液制备
取本品粉末（过4号筛）约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL。称定质量，加热回流2 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，加稀盐酸30 mL，置水浴中加热水解1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用乙醇-醋酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，转移至25 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，结果见图 1。
 | 1-橙黄决明素 2-大黄素 3-大黄酚 4-大黄素甲醚 1-aruantio-obtusin 2-emodin 3-chrysophanol 4-physcion图 1 对照品 (A) 及决明子样品 (B) HPLC色谱图Fig. 1 HPLC of reference substance (A) and Cassiae Semen sample (B) |
