白酒中甜蜜素分析专用高效液相色谱仪采用紫外检测器分析白酒中甜蜜素含量，获得了空白白酒以及不同甜蜜素浓度酒样的高效液相色谱图。根据甜蜜素浓度和峰面积的线性关系建立了标准曲线，并求出回归方程：y ＝ 0.0008x+0.0147(R2 ＝ 0.9991)；对比空白酒样和添加甜蜜素的酒样，差异明显，添加甜蜜素的酒样在7～8min 时有明显的吸收峰，其中甜蜜素浓度为100μg/ml 的酒样峰面积zui大，随着甜蜜素浓度的减小，峰面积也逐渐减小；将不同甜蜜素浓度的酒样进行回收率和精密度分析，得回收率范围为97.04%～115%，经重复测定，得到RSD 为4.1%，定性检测下限为1.5μg/ml，定量检测下限为5.0μg/ml。
甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）是我国广泛使用的甜味剂之一，已应用于食品加工业、制药业、农业等各领域。由于过多食用甜蜜素会对人体产生不良影响，因此在实际使用时需严格控制其添加量。
目前甜蜜素的国家测定标准是GB/T5009.97，该标准是针对食品中甜蜜素的通用检测方法。由于检测时白酒中环己醇及环己基的类似物质可能与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，而被误认为是环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠的反应，造成酒中含有甜蜜素的假象，因此，国标对于甜蜜素的检测方法并不适用于白酒中甜蜜素的检测。
有关白酒中甜蜜素的检测方法目前报道的只有液相色谱- 质谱联用法，由于液相色谱- 质谱联用设备昂贵，普及性并不高。液相色谱在一般的检验部门均有，但目前未见采用液相色谱法检测白酒中甜蜜素的报道。润扬仪器旨在研究采用液相色谱仪检测白酒中甜蜜素的含量，以期为白酒生产企业、各地质检部门对酒类中甜蜜素的检测方法提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
白酒样品为自配，是将无水乙醇溶液与水按 50:50(V/V)配制而成。甜蜜素标准品采购于国家标准物质中心；除甲醇为国产色谱纯外，其余均为国产分析纯试剂。
1.2 仪器
LC-3000U高效液相色谱仪 ，紫外检测器（润扬仪器）；FA2004B电子分析天平；101-2A 型电热鼓风干燥箱 。
1.3 方法
1.3.1 溶液配制
1000 μg/ml 甜蜜素标准储备液：准确称取 100.0mg环已基氨基磺酸钠，用白酒定容至 100ml，配制成浓度为 1000 μg/ml 的甜蜜素标准储备液。系列浓度甜蜜素标准溶液：从 1000 μg/ml 的甜蜜素标准储备液中准确吸取 2、5、10ml 溶液，分别定容至100ml，配制成 20、50、100 μg/ml 的甜蜜素标准溶液；从100 μg/ml的甜蜜素标准溶液中准确吸取5、10ml溶液，分别定容至 100ml，配制成 5、10 μg/ml 的甜蜜素标准溶液；从 20 μg/ml 的甜蜜素标准溶液中准确吸取 10ml，定容至 100ml，配制成 2μg/ml 的甜蜜素标准溶液。
1.3.2 样品处理步骤
准确吸取适量样品溶液于分液漏斗中→加入 2ml 适当浓度的硫酸→加入 5ml 正己烷→加入适量次氯酸钠溶液(有效氯含量 5% 以上) →剧烈振荡后分层，除去水相→加入适量 5%(W/V)的碳酸氢钠溶液→剧烈振荡，分层后除去水相→抽取有机层清液放入小试剂瓶中保存→贴好标签，放入冰箱待测。
1.3.3 白酒中甜蜜素检测的液相色谱法
采用 LC-3000U高效液相色谱仪检测白酒中的甜蜜素。
具体操作条件为：ODS Hypersil 色谱柱(125mm × 4mm，5μm)；流动相：甲醇 – 水 80:20(V/V)；流速：1.0ml/min；检测波长：314nm；进样量：10 μl；
样品制备：样品按实验 1.3.2 中步骤处理后，用微孔过滤膜(0.45μm)过滤后供进样。
1.3.4 空白白酒中甜蜜素含量测定
准确吸取 10ml 空白白酒样品于分液漏斗中，按 1.3.2和 1.3.3 中方法进行处理和测定，得高效液相色谱图。
1.3.5 样品处理关键步骤对甜蜜素检测的影响
1.3.5.1 pH 值的影响
准确吸取 1.0ml 20 μg/ml 的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，分别加入 2ml 体积分数为 10%、20%、30%、40%、50%、60% 的硫酸，按 1.3.2 和 1.3.3 中方法进行处理和测定，研究不同浓度硫酸处理对测定结果的影响。
1.3.5.2 次氯酸钠用量的影响
准确吸取 1.0ml 20 μg/ml的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，加入 2ml 适量浓度硫酸后，再分别依次加入 0.5、1、2、3ml 次氯酸钠溶液，按 1.3.2 和 1.3.3 中方法进行处理和测定，研究不同用量次氯酸钠溶液处理对测定结果的影响 。
1.3.5.3 碳酸氢钠用量的影响
准确吸取 1.0ml 20 μg/ml 的甜蜜素标准溶液于分液漏斗中，按 1.3.2 和 1.3.3 中方法对样品进行处理和测定，研究碳酸氢钠用量对测定结果的影响。
1.3.6 衍生物的稳定性
按方法 1.3.2 和 1.3.3 中方法，将 10 μg/ml 甜蜜素标准溶液经处理后的待测液于室温下放置。间隔一定时间( 分别间隔 0 、1 、4 、6 、8 、1 2 h ) 测定其峰面积，观察生成的 N,N- 二氯环己胺的稳定性。
1.3.7 干扰实验
按方法 1.3.2 和 1.3.3 中方法，于 10 μg/ml 的甜蜜素标准溶液中分别加入 200 μg/ml 糖精钠、1000 μg/ml 苯甲酸和山梨酸，测定这些干扰物质对甜蜜素测定的影响。
1.3.8 甜蜜素标准曲线的绘制
将 100、50、20、10、5、2μg/ml 的甜蜜素标准溶液均按 1.3.2 和 1.3.3 中方法进行处理和测定，得相应谱图。以峰面积为横坐标，对应甜蜜素浓度为纵坐标作图，即得甜蜜素标准曲线。
1.3.9 甜蜜素回收率计算及精密度实验
对 100、50、20、10、5、2μg/ml 不同浓度的甜蜜素酒样按 1.3.2 和 1.3.3 中方法进行处理和测定，对照甜蜜素标准曲线得各实测值，与加标值进行比较，即可进行回收率计算。将 10 μg/ml甜蜜素酒样按1.3.2和1.3.3中方法进行处理和测定，重复测定六次，求出精密度。
1.3.10 检测下限的测定
取不含甜蜜素的白酒 10ml 作为空白试液，按 1.3.2和 1.3.3 中方法进行处理和测定，重复实验 10 次，以空白结果标准偏差的 3 倍求得定性检测下限值，以空白结果标准偏差的 l0 倍求得定量检测下限值。
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