当使用液相色谱仪进行色谱分析时，除了要充分了解高效液相色谱法的基本理论外，还应掌握必需的实验技术，这样才能获得理想的分离效果，从而达到满意的分析结果。
高效液相色谱在采购后面临的使用问题，一般厂家会派人进行必要的仪器安装调试培训，但大部分局限于仪器的正常使用。润扬仪器作为负责任的分析仪器生产厂家必须义务承担着样品分析整体方案的实际应用。当色谱柱的选择确定后，应采用适合组成的流动相进行实验，在实验过程准确控制流动相的流量，防止微米数量级机械杂质阻塞流路，保持较低的柱压力降是实验操作中的关键。为此，润扬仪器色谱小科为大家总结出操作者需掌握的色谱实验技术：
① 溶剂的纯化技术
在高效液相色谱分析中，正相色谱以己烷作为流动相主体，二氯甲烷、氯仿、乙醚作为改性剂；反相色谱以水作为流动相主体，以甲醇、乙腈、四氢呋喃作为改性剂。通常使用分析纯、优级纯试剂，可以满足高效液相色谱分析的要求，但为了防止微粒杂质堵塞流路或柱入口垫片，流动相都需要用G4微孔玻璃漏斗过滤，或用0.45μm的微孔滤膜过滤后再使用。
② 谱柱的填充技术
填充色谱柱的方法，根据固定相微粒的大小有干法和湿法两种。微粒大于20μm的可用干法填充，要边填充边敲打和振动，要填得均匀扎实。直径10μm以下的柱，不能用干法填充，必须采用湿法。
③ 色谱柱的保护与再生技术
高效液相色谱柱填充了高效全多孔球形微粒固定相，并用高压匀浆法填充，其售价较贵，若使用不当，会出现柱理论塔板数下降、色谱峰形变坏、柱压力降增大、保留时间改变等不良现象，从而大大缩短色谱柱的使用寿命。
④ 梯度洗脱技术
在HPLC分析中，梯度洗脱功能相似于气相色谱分析中的程序升温，它对改善色谱分离效果，增加峰容量，可发挥重要的作用。
⑤ 色谱柱前和柱后的衍生化检测技术
当前在高效液相色谱法，蕞常用的高灵敏度检测器是荧光检测器和紫外检测器，但它们只能检测有紫外吸收或在紫外光照射下产生荧光的、具有特定化学结构的化合物。
为了使在这些检测器上响应值很小的化合物也能被检测出来，通过与衍生化试剂反应，使胺、氨基酸、羧酸、醇、醛、酮等有机物生成可吸收紫外光或产生荧光的化合物。
⑥ 样品的预处理技术
对组成复杂的样品或受外界条件（日光照射、受热、电磁辐射、氧化等）作用而发生变化的不稳定样品，都需经过预处理才能进行色谱分析。
掌握上述各种技术，就可更自主的开展工作，并为进一步从事微柱液相色谱分析或二维液相色谱分析创造良好的前提工作条件。
山东润扬仪器仪器有限公司是专业研究、开发、制造和销售气相色谱仪、液相色谱仪、棒状薄层色谱仪、热裂解气相色谱仪及相关配套产品多功能氮吹仪、高纯气体发生器、色谱配件、色谱试剂以及其他分析仪器的技术密集型企业。欢迎各界朋友合作咨询，欲了解更多详细资料请登录润扬仪器网站查找相关内容。
