医用口罩中微生物指标检测方法的探讨

全球新冠肺炎疫情爆发以来，我国所有的人忙着戴口罩、抢购口罩，而西方人则坚信蕞好的个人防护办法，是用“唱完两遍生日歌”的时间一遍又一遍地洗手。“戴，还是不戴口罩？”这个问题一度成为中美社交媒体上的一个极富争议的话题。如今，这一问题似乎尘埃落定——4月3日，美国负责人表示，美国疾控中心（CDC）发布新的指南，力劝所有美国人在离开家门到公共场合时戴口罩。

虽然国内疫情逐渐得到遏制，但国外疫情的暴发给我们带来新的挑战，戴口罩将成为一种常态。为监测医用口罩的质量，保护消费者的身体健康，以更为有效地防治新冠病毒的感染侵扰，国家相继出台了相关标准，主要有GB 19083—2010《医用防护口罩技术要求》，YY0469—2011《医用外科口罩》和YY/T 0969—2013《一次性使用医用口罩》等。这些标准在口罩的综合拉力试验、过滤效率、气体交换压力差、合成血液穿透性、阻燃性能、环氧乙烷残留、微生物指标等方面规定了限值和测试方法，但是通过分析研判这些标准，结合现有口罩实际情况，认为国内出台的医用口罩标准中微生物指标测试方面仍存在着一定的细节不足之处，难以正确合理地评估医用口罩在实际佩戴过程中由于产品本身的问题给消费者带来的潜在危害。由此，润扬仪器技术人员提出了在口罩测试标准中需要完善的部分，以更为准确地评价产品的性能。

1、微生物危害及医用口罩中微生物的限值

一般微生物会附着在颗粒物上，目前已知的空气中大约有1300种微生物，其中有部分已知微生物会引发人类的过敏和肺部疾病。在三个版本的医用口罩标准中均对口罩中微生物进行了限值规定，其中大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和真菌不得检出，细菌菌落总数不大于100 cfu/g 。

值得注意的是，由于佩戴医用口罩除隔绝细菌外，环境空气中往往会存在着一定量的微生物，但目前市售的口罩中大部分都不具有抗菌性，因此这就会使得在使用过程中附着在颗粒物上的微生物被吸附过滤在口罩上。消费者佩戴口罩时的局部微环境为微生物的生长提供了合适的温湿度，在吸气过程中就极有可能将微生物吸入呼吸道，从而带来二次污染。鉴于此，针对医用口罩在附着有一定微生物时，在一定温度和时间下，微生物是否还存在就成为一个值得研究的问题。

2、试验部分

（1）仪器与试剂：恒温恒湿培养箱；水浴锅；高压灭菌锅；生物安全柜；洁净工作台等。

大豆蛋白胨肉汤（TSB）；大豆蛋白胨琼脂培养基（TSA）；营养肉汤（NB）；SCDLP液体培养基；稀释液；计数培养基（EA），均采购于北京陆桥技术有限责任公司。

菌种：大肠杆菌 （ATCC 11229）。

（2）冻干菌的活化

将冻干菌融化分散在5 mL的TSB中呈悬浮状，在37℃ 下培养24 h；用接种环取菌悬液以划线法接种到TSA平皿上，在37℃下培养24 h；从培养皿上取典型菌落接种在TSA斜面试管内，在37℃下培养24 h，斜面试管储存于冰箱内（5℃~10℃）作为保存菌。

（3）试验菌液的培养和制备

培养A：用接种环取保存菌，以划线法接种EA平面皿上，在37℃下培养24 h。

培养B：取20 mL肉汤NB放入到100 mL的锥形瓶内， 用接种环取培养A的典型菌落接种在肉汤内培养，培养条件为温度37℃，振动频率为110 min-1，时间为24 h。

培养C：取20 mL肉汤NB放入到100mL的锥形瓶内，取0.4mL培养B菌液加入瓶内培养，培养后菌浓度为107cfu/mL。培养条件为温度37℃，振动频率为110min-1， 时间为3h。

试样菌液的制备：用水对肉汤NB进行稀释，调节培养C的菌液浓度为103 cfu/mL，作为试验菌液。

测定菌液浓度。

（4）样品的处理

试样的接种：取0.2 mL试验菌液分散接种在小瓶内的试样（试样质量4.00 g）上。

培养及洗脱：将已接种试验菌液的小瓶在37℃下分别培养0h、24h、144h和168h。随后在培养后小瓶中分别加入20mL SCDLP培养基，振荡器振荡5次后将细菌洗下。

菌落数的测定：取1 mL上述溶液分别注入两个平皿内，各加入15 mLEA，室温下放置至培养基凝固后，将平皿倒置放置在37℃下培养48 h，随后对菌落总数进行计数。

3、结果与讨论

常用医用口罩主要分为医用防护口罩、医用外科口罩和一次性使用医用口罩。本试验只针对几种医用口罩开展了0 h和24 h微生物生长情况培养。对于医用防护口罩，则将时间分别设定为0h、24h、144h和168h。

图1给出了一次性防护口罩在0 h和24 h的微生物生长情况，从图中可以明显看出，几种医用口罩在0 h时菌落总数较少，约为5~12 个；经过24 h后，菌落总数有了显著的增加，增长为300~400个左右（下表），充分表明当微生物附着在口罩上时，合适的温度会促进菌群的生长。

经过测试也表明了相同的趋势24 h后菌落总数增长明显，但144 h和168 h的菌落总数有所回落，这可能是时间较长，部分菌出现凋亡所致。

即使新购买的口罩在测试时微生物指标是合格的，但是由于空气中存在着微生物，在使用者佩戴口罩的微环境中，仍可以检测到微生物的增殖，从而为消费者带来二次污染。因此，建议口罩能够采用抗菌性技术，并且在口罩的测试标准中增加抗菌性能测试，以更为有效地保护公众健康。

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